在移植免疫学研究中,小鼠常被用作心脏移植供体和受体。小鼠心脏腹腔异位移植后早期的高技术故障率可能导致术后并发症使受体死亡,如后肢瘫痪或心脏不跳动。心脏移植动物模型可为临床移植患者的治疗提供有价值的信息。
一、麻醉小鼠
1.小鼠仰卧位,用剃去胸部皮肤,用乙醇消毒。在麻醉诱导期间,异氟烷浓度为3%,维持阶段,将其降低到1-1.5%,以保持有规律的呼吸和心率。并在加热垫上操作保持动物的体温。
二、供体取材心脏
1.切开胸腔,从肋骨边缘到肋骨两侧切开胸腔,在腹肌水平处横向切开形成胸壁皮瓣。将此皮瓣固定到头部旁边。撕去心包,露出心脏和血管。
2.一只手用镊子提起下腔静脉IVC,另一只手通过在心脏附近的IVC注射1ml冷肝素化盐水,
然后将小动脉夹在IVC上以防止灌注液回流。
3.用纱布和棉棒将心脏向下移动,露出升主动脉和肺动脉。用一个刀片在主动脉和肺动脉束后的通道(横窦)做微切口,切断主动脉和肺。动脉尽可能在远端切断以确保移植时保持足够吻合长度。
4.将IVC、右上腔静脉(SVC)、左SVC和肺静脉用6–0缝合线结扎并分离。从供体部位切下带远端的血管分离下心脏,然后将心脏保存在4°C的冷无菌盐水中待移植。
三、受体心脏移植(腹腔异位移植)
1.通过腹中线切口进行剖腹术,用弯曲的回形针做成腹腔牵开器。将肠包在无菌盐水浸泡的纱布中并放置在腹部右上方。
2.暴露肾下主动脉和IVC
3.在主动脉和IVC段远端和近端施用微血管阻断。在主动脉前壁开一个切口:首先用30G针刺穿孔;然后在显微镜下垂直切开切口以匹配供体主动脉的大小。用肝素化盐水冲洗主动脉腔除去任何血凝块。
4.将供体心脏放置在腹部的右侧。确保供体主动脉邻近受体主动脉上的切口定位,供体肺动脉邻近受体IVC定位。
5.用10–0缝合线从近端开始缝合,将供体主动脉与受体主动脉端对侧吻合。
6.将供体肺动脉(PA)与受体IVC端对侧吻合。
7.松开血管夹前,将明胶海绵片置于吻合口周围,用棉球轻轻按压施加器直到止血。在松开血管前,先松开远端微血管夹,然后松开近端微血管夹。
8.循环重建后,将37℃的温盐水浸润移植物表面以帮助其恢复。移植物通常可以立即开始颤动,并在几分钟内自发恢复到窦性节律。皮下注射0.6ml温盐水以维持受体体液平衡。
9.用5-0可吸收的缝合线缝合腹部伤口。
C57BL/6小鼠心脏移植后灌注良好
不同供体/受体组合的心脏移植物存活率
参考文献
Citation:Wang,C.,Wang,Z.,Allen,R.,Bishop,G.A.,Sharland,A.F.AModifiedMethodforHeterotopicMouseHeartTransplantion.J.Vis.Exp.(88),e,doi:10./().
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